自填式管柱(self-packed columns)之品質控制

填充管柱後,建議在進行樣品純化之前,使用標準樣品進行理論塔板數(N, number of theoretical plates)、理論塔板高度(HETP, height equivalent to a theoretical plate)和峰不對稱因子(As, peak asymmetry factor)測試及計算。藉由定期和重複執行此類標準測試,可以有效地評估膠體(gel, packing material)的品質和耐用性。 如果您想比較各個測試之間的結果,建議在每次測試中在相同條件下使用相同的測量設備。測量結果可能會受到一些因素影響,例如:死體積(dead volume)、流速(flow rate)、溫度(temperature)、沖提液(eluent)和進樣量(sample loading amount)的差異。

下列公式可用於計算理論塔板數(N, number of theoretical plates)。 較大的 N 值對應於層析管柱中較高的填充膠體密度。 此外,在固定滯留時間(retention time),峰形越窄,N 值越高;柱長越長,粒徑越小,N 值越大。 通常,每柱床長(m)的理論塔板數通常用作評估層析管柱純化性能的指標。

N = 5.54 x (tR / W0.5h)2
N/m = N / L
L = Column bed length (m)

理論塔板高度 (HETP, height equivalent to a theoretical plate)有時也用作評估層析管柱性能的指標。 下列公式可用於計算 HETP。 該值越小,填充在柱中的膠體密度越高。

HETP = L / N

洗脫峰形 (peak shape)也是評估層析管柱性能的重要因素。 峰不對稱因子 (As) 的測定是一種相對簡單的估計層析管柱性能的方法。 下列公式可用於計算 As,該值越接近“1”是越理想的,其表示越高的峰形對稱性。

As = b / a

HPLC技術指引:管柱平衡(Column Equilibration)

我應該平衡HPLC管柱多久時間呢?

在執行梯度條件後進行下一次進樣前之HPLC層析管柱平衡時,如果(重新)平衡時間太短,則會出現實驗重複性不佳的風險。如果時間太長,則會浪費時間和溶劑。

在本HPLC技術指引中,您將學習如何通過計算管柱體積來估算最佳平衡體積。此外,還使用了一個實際案例來顯示不同平衡體積對分析結果的影響。有關管柱平衡的詳細說明,您可以在此處下載HPLC技術指引。