分類: <span>技術資料</span>

離子配對反相液相層析（Ion Pair Reversed Phase, IP-RP）是目前分析寡核苷酸（oligonucleotides）的黃金標準。

然而，常用的含氟醇類離子配對試劑（例如 1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇，HFIP）在成本與環境影響上都存在顧慮，因此極需替代方案。

本應用根據 Hayashi 與 Sun 的研究 [1]，
展示了一種不使用離子配對試劑的反相層析（non-IP-RP）方法，
以 碳酸氫銨（ammonium bicarbonate） 作為移動相添加劑，用於治療性寡核苷酸的分析。

研究顯示，碳酸氫銨 對質譜（MS）靈敏度具有正面影響。
在加熱條件下（約 60 °C），碳酸氫銨會分解為氨（NH₃）與二氧化碳（CO₂），
後者在 ESI（電灑游離）微滴中形成氣泡 [2]。
同時，氨與銨離子間的平衡（NH₃ ⇌ NH₄⁺ + H⁺）也可能是關鍵因素：
在 ESI 微滴中，氨氣揮發後留下的質子（H⁺）能與分析物形成加合離子（adducts），增強訊號。

因此，碳酸氫銨 搭配 具生物惰性塗層的 YMC Accura Triart C18 管柱，成為質譜高靈敏檢測的理想組合。

該方法的適用性已通過多種市售、含化學修飾的寡核苷酸樣品驗證，
其中包括 6 種反義寡核苷酸（ASO）、3 種 siRNA 以及 4 種類似物（analogues）。

此外，該方法在分析重構血漿樣品中的 lumasiran（Lum, Oxlumo®） 時，
也證實其可應用於生物分析（bioanalysis），展現了高靈敏度與廣泛適用性。

References:
[1] Yoshiharu Hayashi and Yuchen Sun, Journal of the American Society for Mass Spectrometry Article ASAP, DOI: 10.1021/jasms.4c00270

[2] House, J. E. Decomposition of ammonium carbonate and ammonium bicarbonate and proton affinities of the anions.
Inorganic and Nuclear Chemistry Letters 1980, 16 (4), 185-187.

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全氟與多氟烷基物質 (PFAS)是 持久性環境污染物，以其極長壽命與高遷移性著稱。

其穩定性導致其在地下水和土壤中累積，並已證實對健康造成危害。

為了減少環境汙染，目前已有多種 PFAS 化合物被納入管制，
例如 全氟辛酸（PFOA）、全氟己烷磺酸（PFHxS），以及 長鏈全氟烷基羧酸（C9–C14） 等。

本技術說明介紹了一種利用 YMC-Triart C18 高效液相層析管柱
進行 PFAS 化合物 鑑定與定量分析 的方法。

此管柱採用強韌的 混合型矽膠顆粒（hybrid silica particle） 製成，
在結合質譜分析（MS）時，可提供 更佳的異構物分離能力 與 更高的分析性能。

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精確且快速的寡核苷酸分析，能有效支援高效率的生產流程與穩定的品質。

本應用說明展示了如何利用 長度 30 mm 的 YMC Accura BioPro IEX QF 管柱，在 70 °C 條件下，

對一組由六條寡核苷酸組成的混合物 (12–33 mer, Supelco)進行高效分離，並在 不到兩分鐘內 即可獲得高解析度的分析結果。

由於該管柱具備 緊湊的結構 與 卓越的熱穩定性，此管柱是 寡核苷酸生產過程中高通量生物分析 與 嚴格品質管控 的理想選擇。

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Tirzepatide 同時作為 胰高血糖素樣胜肽-1（GLP-1） 及 葡萄糖依賴性促胰島素多肽（GIP） 受體促效劑，
使其成為治療 第二型糖尿病 的有效藥物，兼具 降血糖與減重 的雙重作用。

由於這類藥物具有明確的臨床價值與藥理穩定性，
GLP-1 受體促效劑 已在全球製藥市場中占有穩固地位。
因此 精確的品質管控 至關重要，
特別是因為 胺基酸序列 與 高階結構（higher-order structure）
對治療效能有顯著影響。

本應用報告說明了 針對 Tirzepatide 分析方法的系統性開發流程。
此篩選方法評估以下幾點：

• 移動相的 pH 值 與 有機改質劑 (organic modifier)

• 管柱溫度控制 (column temperature)

• 固定相化學特性 (stationary phase chemistry)

• 生物惰性管柱硬體設備 (bioinert column hardware) 的影響

整體目的是建立一種 穩健（robust）且可重現性高 的 Tirzepatide 分析方法。

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以寡核苷酸 (oligonucleotide) 為基礎的治療藥物，在臨床應用上展現出越來越高的重要性與潛力。
目前已有多種寡核苷酸類治療藥物獲得批准，其他產品也正在臨床試驗階段中推進。

然而，如何有效將藥物遞送至目標細胞 仍是一大挑戰，
因為寡核苷酸與細胞膜皆帶有負電荷，使得治療性寡核苷酸 (例如 siRNA (小干擾 RNA) 或 ASO (反義寡核苷酸) )難以穿越細胞膜。

為了改善此問題，可將寡核苷酸與具細胞膜通透性的胜肽 (例如 寡精胺 oligoarginine) 結合，以顯著提升細胞內遞送效率。

這類 胜肽–寡核苷酸偶聯物 (POCs, Peptide-Oligonucleotide Conjugates) 能促進細胞內輸送，進而提高治療潛力。

目前大多數成熟的合成流程，仍採用「後合成偶聯 (post-synthetic coupling)」的方式，也就是分別製備寡核苷酸與胜肽後再進行結合。

但若偶聯不完全，會降低細胞內的輸送效率。
因此需要進行精確的品質管控 (Quality Control)。

然而要準確區分結構非常相似的雜質仍具有高度技術挑戰，這就要求分析方法必須具備極高的精度與解析能力。

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將離子交換層析(IEX)直接與質譜(MS)聯用，是一項能夠簡化分析流程並減少因冗長的分離步驟所造成偽影(Artefacts)的革命性突破。

雖然使用揮發性緩衝液與鹽類使得 IEX 與 MS 的耦合成為可能，
但離子交換色譜法(IEX) 分離中常用的高鹽濃度，仍對質譜(MS)的相容性構成挑戰。

為克服此問題，可以採用耐高鹽度的 奈米電噴灑游離源 (nano-electrospray ionisation, nanoESI)，
並可搭配如流量分流器 (flow splitter)等系統化配置，將流量降至 sub-µL/min。

然而，若進一步採用 內徑 (ID)更小、且具生物惰性塗層的 IEX 管柱，
則能獲得更顯著的效能提升。
這樣的設定可帶來 更銳利的峰形、更高的分離解析度，以及最佳的回收率——
甚至在第一次進樣時就能達成。

本應用報告證明使用 內徑 2.1 mm、具生物惰性塗層的 YMC Accura BioPro IEX SF 管柱，
在與質譜 (MS) 耦合時，相較於傳統 內徑 4.6 mm 的 PEEK 管柱，能夠提供更優異的分離解析度。

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Antibody&ADCs Application

由於人工甜味劑沒有卡路里的優點，經常被用來取代糖並添加於食物中。經常使用的Acesulfame, Saccharin, Cyclamate Na由於有不容易被分解的性質，因此成為了水污染物，需要一個高靈敏度的方法進行檢測。

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siRNA 是基因分析和代謝疾病治療的有力工具。 siRNA 可以在非變性雙鏈條件下使用 HPLC 分析，以控制雙鏈體型態和單鏈的總量。 此外，可以在變性條件下研究非雜交的單鏈 RNA。 在這兩種情況下，IP-RP 和 AEX 都是常用的方法。

在本應用文章中，展示了在變性和非變性條件下對雙鏈 siRNA 的分析。 生物惰性層析管柱 YMC-Accura Triart Bio C18 UHPLC 用於 IP-RP 模式，而離子交換樹脂 BioPro IEX QF 層析管柱用於 AEX 模式。

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這篇範例說明使用IP-RP UHPLC進行複雜oligonucleotide樣品純化前的定性與定量實驗。

此應用資料使用YMC Triart C18 UHPLC於IP-RP模式進行crude oligonucleotide的分離。

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