此篇應用介紹了一種優化的陰離子交換樹脂管柱層析法 (Anion Exchange chromatography, AEX) 來測量 mRNA 在 LNP（脂質奈米粒子）中的包覆率/封裝效率(Encapsulation Efficiency, EE)。
此技術提升 LNP 製劑的品質控制，特別適合高純度 mRNA 藥物產品開發與製程評估，讓包覆率/封裝效率(EE)的數據更加準確可靠。
技術優勢 與傳統螢光光譜法相比，AEX 方法不僅分析速度快、單次測試成本更低，還能提供 LNP 額外的結構資訊。它能有效排除因表面附著 mRNA 所造成的數據誤判，是常規品管與分析流程中，更穩定且精密的升級替代方案。
此篇應用開發出離子對陰離子交換樹脂(IPAX)搭配離子對逆相層析分離的技術，對mRNA目前的指紋辨識的瓶頸(例如定序、LCHRMS)提供另一個簡單與穩定的分析策略。
面臨挑戰： 隨著 mRNA 療法的蓬勃發展，業界急需快速、可靠的品質控制方法來確認 mRNA 序列，以取代傳統耗時的定序工作流程或複雜的質譜分析。
解決方案： 本技術說明介紹了一種創新的二維液相層析策略，結合了離子對介導陰離子交換 (IPAX) 與離子對逆相 (IP-RP) 層析法，並使用具備生物惰性塗層的 YMC Accura BioPro IEX QF 管柱進行第一維分離。
方法優勢： IPAX 方法有效改善了傳統 AEX 的解析度限制。透過此二維技術，僅需進行單次 RNase 消化，即可針對複雜的 mRNA 樣品（如 eGFP 與疫苗成分 Raxtozinameran）繪製出高解析度的特徵指紋圖譜，精準區分不同的 mRNA 序列與結構（如 polyA 尾），為 mRNA 的品管提供強大且靈活的分析工具。
以寡核苷酸 (oligonucleotide) 為基礎的治療藥物，在臨床應用上展現出越來越高的重要性與潛力。
目前已有多種寡核苷酸類治療藥物獲得批准，其他產品也正在臨床試驗階段中推進。
然而，如何有效將藥物遞送至目標細胞 仍是一大挑戰，
因為寡核苷酸與細胞膜皆帶有負電荷，使得治療性寡核苷酸 (例如 siRNA (小干擾 RNA) 或 ASO (反義寡核苷酸) )難以穿越細胞膜。
為了改善此問題，可將寡核苷酸與具細胞膜通透性的胜肽 (例如 寡精胺 oligoarginine) 結合，以顯著提升細胞內遞送效率。
這類 胜肽–寡核苷酸偶聯物 (POCs, Peptide-Oligonucleotide Conjugates) 能促進細胞內輸送，進而提高治療潛力。
目前大多數成熟的合成流程，仍採用「後合成偶聯 (post-synthetic coupling)」的方式，也就是分別製備寡核苷酸與胜肽後再進行結合。
但若偶聯不完全，會降低細胞內的輸送效率。
因此需要進行精確的品質管控 (Quality Control)。
然而要準確區分結構非常相似的雜質仍具有高度技術挑戰，這就要求分析方法必須具備極高的精度與解析能力。
將離子交換層析(IEX)直接與質譜(MS)聯用，是一項能夠簡化分析流程並減少因冗長的分離步驟所造成偽影(Artefacts)的革命性突破。
雖然使用揮發性緩衝液與鹽類使得 IEX 與 MS 的耦合成為可能，
但離子交換色譜法(IEX) 分離中常用的高鹽濃度，仍對質譜(MS)的相容性構成挑戰。
為克服此問題，可以採用耐高鹽度的 奈米電噴灑游離源 (nano-electrospray ionisation, nanoESI)，
並可搭配如流量分流器 (flow splitter)等系統化配置，將流量降至 sub-µL/min。
然而，若進一步採用 內徑 (ID)更小、且具生物惰性塗層的 IEX 管柱，
則能獲得更顯著的效能提升。
這樣的設定可帶來 更銳利的峰形、更高的分離解析度，以及最佳的回收率——
甚至在第一次進樣時就能達成。
本應用報告證明使用 內徑 2.1 mm、具生物惰性塗層的 YMC Accura BioPro IEX SF 管柱，
在與質譜 (MS) 耦合時，相較於傳統 內徑 4.6 mm 的 PEEK 管柱，能夠提供更優異的分離解析度。
由於人工甜味劑沒有卡路里的優點，經常被用來取代糖並添加於食物中。經常使用的Acesulfame, Saccharin, Cyclamate Na由於有不容易被分解的性質，因此成為了水污染物，需要一個高靈敏度的方法進行檢測。
siRNA 是基因分析和代謝疾病治療的有力工具。 siRNA 可以在非變性雙鏈條件下使用 HPLC 分析，以控制雙鏈體型態和單鏈的總量。 此外，可以在變性條件下研究非雜交的單鏈 RNA。 在這兩種情況下，IP-RP 和 AEX 都是常用的方法。
在本應用文章中，展示了在變性和非變性條件下對雙鏈 siRNA 的分析。 生物惰性層析管柱 YMC-Accura Triart Bio C18 UHPLC 用於 IP-RP 模式，而離子交換樹脂 BioPro IEX QF 層析管柱用於 AEX 模式。
這篇範例說明使用IP-RP UHPLC進行複雜oligonucleotide樣品純化前的定性與定量實驗。
此應用資料使用YMC Triart C18 UHPLC於IP-RP模式進行crude oligonucleotide的分離。
YMC使用Chiral ART Column開發出Imeglimin分離條件!
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寡核苷酸的製備級分離純化可能是一個巨大的挑戰。 IP-RP 的條件使用非常有利於開發有效的分離方法，但需要特殊的技術。 這份新的應用說明了離子對試劑通過 IP-RP 分離寡核苷酸的原理和優勢。
對於使用 IP-RP 方法純化寡核苷酸，YMC 提供了幾個非常適合的固定相。 YMC-Triart 材料提供額外的優勢，例如延長使用壽命和擴大可使用的 pH 範圍。
使用UHPLC 方法於分析五種生物標誌物：尼古丁(nicotine)和可替寧(cotinine)，以及 NNAL 以及 8-OhdG 和 m7Gua。
RP 和 HILIC 均可實現高分辨度峰型和快速分離。
尼古丁檢測中同時測定了代謝物可替寧。這裡的挑戰是，需在很短的時間內完成檢測。
NNAL，一種肺部致癌物 NNK 的分解產物，也適用同一分析條件。此外，抽菸時人類細胞也承受氧化壓力，因此典型的生物標誌物 8-OhdG和 m7Gua 也被一起評估。
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