分類: <span>技術資料</span>

以寡核苷酸 (oligonucleotide) 為基礎的治療藥物，在臨床應用上展現出越來越高的重要性與潛力。
目前已有多種寡核苷酸類治療藥物獲得批准，其他產品也正在臨床試驗階段中推進。

然而，如何有效將藥物遞送至目標細胞 仍是一大挑戰，
因為寡核苷酸與細胞膜皆帶有負電荷，使得治療性寡核苷酸 (例如 siRNA (小干擾 RNA) 或 ASO (反義寡核苷酸) )難以穿越細胞膜。

為了改善此問題，可將寡核苷酸與具細胞膜通透性的胜肽 (例如 寡精胺 oligoarginine) 結合，以顯著提升細胞內遞送效率。

這類 胜肽–寡核苷酸偶聯物 (POCs, Peptide-Oligonucleotide Conjugates) 能促進細胞內輸送，進而提高治療潛力。

目前大多數成熟的合成流程，仍採用「後合成偶聯 (post-synthetic coupling)」的方式，也就是分別製備寡核苷酸與胜肽後再進行結合。

但若偶聯不完全，會降低細胞內的輸送效率。
因此需要進行精確的品質管控 (Quality Control)。

然而要準確區分結構非常相似的雜質仍具有高度技術挑戰，這就要求分析方法必須具備極高的精度與解析能力。

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將離子交換層析(IEX)直接與質譜(MS)聯用，是一項能夠簡化分析流程並減少因冗長的分離步驟所造成偽影(Artefacts)的革命性突破。

雖然使用揮發性緩衝液與鹽類使得 IEX 與 MS 的耦合成為可能，
但離子交換色譜法(IEX) 分離中常用的高鹽濃度，仍對質譜(MS)的相容性構成挑戰。

為克服此問題，可以採用耐高鹽度的 奈米電噴灑游離源 (nano-electrospray ionisation, nanoESI)，
並可搭配如流量分流器 (flow splitter)等系統化配置，將流量降至 sub-µL/min。

然而，若進一步採用 內徑 (ID)更小、且具生物惰性塗層的 IEX 管柱，
則能獲得更顯著的效能提升。
這樣的設定可帶來 更銳利的峰形、更高的分離解析度，以及最佳的回收率——
甚至在第一次進樣時就能達成。

本應用報告證明使用 內徑 2.1 mm、具生物惰性塗層的 YMC Accura BioPro IEX SF 管柱，
在與質譜 (MS) 耦合時，相較於傳統 內徑 4.6 mm 的 PEEK 管柱，能夠提供更優異的分離解析度。

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Antibody&ADCs Application

由於人工甜味劑沒有卡路里的優點，經常被用來取代糖並添加於食物中。經常使用的Acesulfame, Saccharin, Cyclamate Na由於有不容易被分解的性質，因此成為了水污染物，需要一個高靈敏度的方法進行檢測。

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siRNA 是基因分析和代謝疾病治療的有力工具。 siRNA 可以在非變性雙鏈條件下使用 HPLC 分析，以控制雙鏈體型態和單鏈的總量。 此外，可以在變性條件下研究非雜交的單鏈 RNA。 在這兩種情況下，IP-RP 和 AEX 都是常用的方法。

在本應用文章中，展示了在變性和非變性條件下對雙鏈 siRNA 的分析。 生物惰性層析管柱 YMC-Accura Triart Bio C18 UHPLC 用於 IP-RP 模式，而離子交換樹脂 BioPro IEX QF 層析管柱用於 AEX 模式。

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這篇範例說明使用IP-RP UHPLC進行複雜oligonucleotide樣品純化前的定性與定量實驗。

此應用資料使用YMC Triart C18 UHPLC於IP-RP模式進行crude oligonucleotide的分離。

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New Application Note: Purification of Oligonucleotides via IP-RP

寡核苷酸的製備級分離純化可能是一個巨大的挑戰。 IP-RP 的條件使用非常有利於開發有效的分離方法，但需要特殊的技術。 這份新的應用說明了離子對試劑通過 IP-RP 分離寡核苷酸的原理和優勢。

對於使用 IP-RP 方法純化寡核苷酸，YMC 提供了幾個非常適合的固定相。 YMC-Triart 材料提供額外的優勢，例如延長使用壽命和擴大可使用的 pH 範圍。

Rapid Analysis of Tobacco Smoke Biomarkers

使用UHPLC 方法於分析五種生物標誌物：尼古丁(nicotine)和可替寧(cotinine)，以及 NNAL 以及 8-OhdG 和 m7Gua。

RP 和 HILIC 均可實現高分辨度峰型和快速分離。
尼古丁檢測中同時測定了代謝物可替寧。這裡的挑戰是，需在很短的時間內完成檢測。
NNAL，一種肺部致癌物 NNK 的分解產物，也適用同一分析條件。此外，抽菸時人類細胞也承受氧化壓力，因此典型的生物標誌物 8-OhdG和 m7Gua 也被一起評估。

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