層析是什麼? What Is Chromatography?

層析技術(Chromatography,例如:液相層析Liquid Chromatography)是現代科學的基礎。對許多研究人員而言,它不僅是一項單一技術,而是會隨著專案共同演進的過程。方法會改變,探討的問題會更精確聚焦,而最初「分析級」(Analytical)的挑戰,往往會擴展為「製備級」(Preparative)的挑戰。這時,擁有合適的工具與理想的合作夥伴,將會帶來截然不同的結果。

Luccas Name 是 YMC America 負責拉丁美洲地區的應用專家,他的工作結合了理論與實務,為科學家在層析流程的各個階段提供支援。從早期的分析方法開發到大規模純化,他的職責與其說是銷售產品,更著重於協助研究人員解決實際的分離難題。

層析技術的核心是由平衡所驅動的分離作用——也就是樣品(sample)、固定相(stationary phase)與流動相(mobile phase)之間受控的交互作用。然而在實際應用中,這種平衡並非一成不變。用來解析複雜混合物的分析方法,可能很快就會轉變為以純化分離出活性化合物為目標的製備流程。在某種規模下可行的方法,到了另一種規模可能就需要全面重新評估。

這正是 YMC 全方位(end-to-end)解決方案的價值所在。YMC 不僅提供單一元件,更支援從方法開發、純化到放大規模(scale-up)的完整層析流程。科學家可以與 YMC 團隊合作,進行固定相的選擇、方法的開發與最佳化,隨後利用可擴充的層析管柱、客製化系統以及專屬的實驗室服務,將這些方法進一步應用於製備級純化。其目標在於保持連貫性:減少轉換過程中的摩擦與突發的阻礙,並鋪設一條從數據分析到實質材料產出的明確路徑。

特別是在製藥與生物製藥的開發過程中,層析技術鮮少只是一項分析上的例行公事。它是產出符合製劑(formulation)與製造品質要求之材料的關鍵步驟。要支援這項流程,不僅需要穩定可靠的層析介質(media)與硬體設備,更需要深入了解當條件、溶劑和規模改變時,分子間的交互作用會發生何種轉變。

在這篇專訪中,Luccas 沒有將層析技術視為抽象的概念,而是將其闡釋為一個由交互作用、流動與特定目的所形塑的動態過程。

層析儀是什麼? What is a Chromatograph?

層析儀 (Chromatograph):層析發生的場所

從核心本質來看,層析儀 (Chromatograph) 是用來執行 層析法 (Chromatography) 的儀器。它是移動您的 樣品 (Sample)、實現 分離 (Separation) 並產生您所分析之 數據 (Data) 的系統。 層析儀並非單一裝置,而是由數個連接的 模組 (Modules) 所組成。每個模組各司其職,共同建構出一個完整的分析或純化平台。

層析儀的核心組件

一台典型的層析儀包含以下按順序運作的必要模組:

1. 泵浦 (The Pump):驅動系統

泵浦 (Pump) 是層析儀的驅動力量,或稱為「引擎」。 其主要功能是以受控且一致的 流速 (Flow rate) 推動 流動相 (Mobile phase) 流經系統。

  • 流動相保持「流動」狀態。
  • 樣品得以在系統中移動。
  • 實現具有 再現性 (Reproducible) 的分離效果。

若沒有穩定的泵浦,便無法進行可靠的層析。

2. 取樣器 (The Sampler):導入樣品

接下來是 取樣器 (Sampler)、自動取樣器 (Autosampler) 或 進樣器 (Injector)。 進樣方式可分為:

  • 全自動:使用 樣品瓶 (Vials) 與機械手臂進樣。
  • 半自動。
  • 手動:使用 進樣閥 (Valve) 與 注射器 (Syringe)。 無論形式為何,進樣器都能確保樣品被精確地導入流動的流動相中。

3. 管柱恆溫箱 (The Column Oven):控制溫度

溫度 (Temperature) 在層析效能中扮演關鍵角色,管柱恆溫箱的功能:

  • 容納 層析管柱 (Chromatography column)。
  • 維持穩定且受控的溫度。
  • 提升再現性與分離品質。

4. 管柱 (The Column):分離發生的地點

層析管柱位於管柱恆溫箱內,這是實際發生 分離 (Separation) 的地方。 在 高效能液相層析 (HPLC) 中,管柱是整個系統的心臟。

5. 偵測器 (The Detector):觀察結果

分離後,待測物 (Analytes) 會抵達 偵測器 (Detector)。 任務是:

  • 感測流過的化合物。
  • 將訊號轉換為可測量的數據。
  • 記錄用於生成 層析圖 (Chromatogram) 的資訊(如下圖)。

層析圖 (The Chromatogram)

層析圖

這些數據讓科學家能夠充滿信心地對化合物進行 定性 (Identify)、定量 (Quantify) 與分析。

6. 廢液或餾分收集 (Waste or Fraction Collection):最後步驟

  • 分析級層析: 沖提液 (Eluent) 通常流向 廢液桶 (Waste container)。
  • 純化級層析: 會使用 餾分收集器 (Fraction collector),收集目標化合物以供後續使用。

層析儀各元件如何協同運作

  1. 泵浦 移動流動相。
  2. 進樣器 注入樣品。
  3. 管柱恆溫箱 穩定溫度。
  4. 管柱 分離化合物。
  5. 偵測器 記錄訊號。
  6. 輸出物送往廢液桶或被收集。

為什麼了解您的層析儀至關重要

  • 優化 方法開發 (Method development)。
  • 提升再現性。
  • 進行系統 故障排除 (Troubleshooting)。
  • 發揮管柱的最大效能。
  • 確保數據的可靠性。

可靠層析的基石

正如 Luccas 所解釋的,層析儀不只是台機器,它是每項層析實驗的基石。在 YMC,我們相信精通您的層析儀是實現卓越分離與可靠分析結果的第一步。 如果您想進一步了解如何優化您的層析系統或為您的應用選擇合適的管柱,YMC 團隊隨時為您提供協助。

如何選擇HPLC層析管柱(How to choose HPLC Column)

進行HPLC系統操作時,操作人員常常會面臨管柱(Column)選擇之困擾。樣品種類、分離目的延伸出各種材質、規格之層析管柱,以下我們以四種判斷方式來進行說明:分離模式、管柱規格、樣品特性、分離目的。

分離模式(Separation Modes)

管柱規格

管柱的基本性質可分為
■ 膠體結構:矽膠(YMC採用柱效高之球型材質)、聚合物
■ 表面修飾官能基:常見材質有C18, phenyl, NH2…等,更多官能基材質選擇請參考這裡
■ 粒徑(分析級使用<2μm~10μm,純化使用5μm~>50μm):粒徑越小分離效果越好但壓力也會越高
■ 孔徑(nm或Å):依照分子大小選擇(大致上分子量<1~3萬之分子可選用8-12nm(80-120Å)之孔徑,孔徑大小選擇也會影響到比表面積
■ 管柱內徑:依樣品負荷量選擇,UHPLC常用2.0或2.1mm,HPLC常用4.6mm內徑。YMC可提供:
–NanoLC Column:75μmID~500μmID
–UHPLC Column:2.0~3.0mmID
–HPLC Column:2.0~8.0mmID
–Prep LC Column:10-1000mmID
(除上述之規格需求,請與我們聯繫諮詢info@ymctaiwan.com)

樣品特性

小分子有機化合物分離

Pharmaceutical products 藥品
Agricultural chemicals 農藥
Food additives 食品添加劑
Natural products 天然物
Others 其他
Reversed-phase 逆相層析 YMC-Triart C18 管柱
YMC-Triart C18 ExRS 管柱
YMC-Triart C8 管柱
YMC-Triart Phenyl 管柱
Normal-phase 正相層析 Pack SIL, SIL-06 管柱
YMC-Pack Diol-NP 管柱
HILIC 親水性層析 YMC-Triart Diol-HILIC 管柱

Vitamins 維他命
Reversed-phase 逆相層析
Water-soluble vitamins
水溶性維他命
YMC-Triart C18 管柱
Fat-soluble vitamins
脂溶性維他命
YMC-Triart C18 管柱
YMC-Triart C18 ExRS 管柱
Pack ODS-AL 管柱
Carotenoid 管柱
HILIC 親水性層析 Polyamine II 管柱
Triart Diol-HILIC 管柱
Normal-phase 正相層析 Fat-soluble vitamins
脂溶性維他命
Pack SIL, SIL-06 管柱
Polyamine II 管柱

Organic acids 有機酸
Fatty acids 脂肪酸
Reversed-phase 逆相層析 YMC-Triart C18 管柱
Normal-phase 正相層析 Pack SIL, SIL-06 管柱

Phospholipids 磷脂質
Reversed-phase 逆相層析 YMC-Triart C18 管柱
Normal-phase 正相層析 Pack PVA-Sil 管柱

Amino acids 胺基酸
HILIC 親水性層析 Free amino acids
游離胺基酸
Triart Diol-HILIC 管柱
Reversed-phase 逆相層析 Free amino acids
游離胺基酸
Labeled amino acids
標記胺基酸
YMC-Triart C18 管柱
Hydrosphere C18 管柱

Structural isomers 結構異構物
Reversed-phase 逆相層析 YMC-Triart C18 ExRS 管柱
Carotenoid 管柱
YMC-Triart C8 管柱
YMC-Triart PFP 管柱
CHIRAL ART Immobilized type 管柱
CHIRAL ART Coated type 管柱
Normal-phase 正相層析 Pack SIL, SIL-06 管柱
CHIRAL ART Immobilized type 管柱
CHIRAL ART Coated type 管柱

Optical isomers
CHIRAL ART Immobilized type 管柱
CHIRAL ART Coated type 管柱

大分子生物樣品分離

生物樣品之分析與純化層析基礎

Proteins, Peptides
蛋白質、胺基酸
Ion exchange 離子交換層析 BioPro IEX 管柱
Size exclusion 分子篩層析 SEC MAB/YMC-Pack Diol 管柱
Hydrophobic 疏水性層析 BioPro HIC HT 管柱
BioPro HIC BF 管柱
Reversed-phase 逆相層析 YMC-Triart Bio C18 管柱
YMC-Triart Bio C4 管柱
Meteoric Core C18 BIO 管柱
HILIC 親水性層析 Triart Diol-HILIC 管柱

Nucleic acids 核酸
Ion exchange 離子交換層析 Oligonucleotides 寡核苷酸
Nucleic acids 核酸
BioPro IEX 管柱
Size exclusion 分子篩層析 Oligonucleotides 寡核苷酸
Nucleic acids 核酸
YMC-SEC MAB/YMC-Pack Diol 管柱
Hydrophobic 疏水性層析 Oligonucleotides 寡核苷酸
Nucleic acids 核酸
BioPro HIC HT 管柱
Reversed-phase 逆相層析 Nucleic acid bases 核酸鹼基
Nucleosides 核苷
Nucleotides 核苷酸
Oligonucleotides 寡核苷酸
YMC-Triart Bio C18 管柱
YMC-Triart Bio C4 管柱
Meteoric Core C18 BIO 管柱
HILIC 親水性層析 Nucleic acid bases 核酸鹼基
Nucleosides 核苷
Nucleotides 核苷酸
Triart Diol-HILIC 管柱
Polyamine II 管柱

Sugers, Saccharides
醣類
Size exclusion 分子篩層析 SEC MAB/YMC-Pack Diol 管柱
Reversed-phase 逆相層析 YMC-Triart Bio C18 管柱
YMC-Triart Bio C4 管柱
Meteoric Core C18 BIO 管柱
HILIC 親水性層析 Triart Diol-HILIC 管柱
Polyamine II 管柱

分離目的

除分析樣品外,有時會需要使用製備級管柱進行樣品之純化,然而純化放大不僅僅是換支大內徑的管柱就好,對於分離度、收率以及成本的考量都是無法在分析級管柱就估算得出來的。YMC是少數除提供LC分析級管柱外還能提供大量純化系統、管柱、膠體之供應商。對於客戶來說,不需要在面臨放大需求時而重新測試分析級的條件,並可供應從實驗室級~試量產一路放大至大規模生產。以下表格為進行放大純化時的考量方向:

關於純化系統、管柱之選擇請參考這裡。

關於純化膠體之選擇請參考這裡。

如上述內容無法解決您實驗上的問題,歡迎來電/信與我們討論。